高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗的多糖含量

Quantitative determination of polysaccharide content in diphtheria tetanus acellular component pertussis and inactivated poliomyelitis and Haemophilus type b conjugate combined vaccine by high performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detector

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摘要目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和 b 型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称 DTacP-sIPV-Hib)中多糖含量,并对方法进行验证.方法在 1 ml 样品中加入 0.02 g 柠檬酸钠,振荡混匀后,置于 37℃保温 24 h,4000×g 离心 5 min 收集上清液,稀释后加入 6 mol/L 盐酸,100℃下加热 2 h,冰浴 10 min后加入 0.8 ml 氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解.采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量,通过 PRP 占多糖含量干重的 41.3%计算出总的多糖含量.结果核糖醇参考品浓度在 0.1～1.5 μg/ml 范围内标准曲线 r2>0.99,检测下限可达 10 ng/ml.核糖醇加标回收率均在 95%～105%;对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)均小于 5%,方法专属性和耐用性良好.结论使用柠檬酸钠作为解吸附剂,与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于 DTacP-sIPV-Hib 中 Hib多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考.