换一批
换一批摘要目的 利用大肠杆菌原核表达系统制备人白细胞介素-6(IL-6)重组蛋白,并对蛋白进行纯化,为后期制备 IL-6 标准物质和质控品提供候选物质基础.方法 以现有 IL-6 原核表达质粒 6His-IL-6-pET-28a(+)为模板,通过 PCR 扩增目的片段,并在其 N 端添加 His标签.通过酶切连接的方式,将该段基因克隆至 pRSFDuet载体,随后转化 BL21 感受肽获得表达菌株.利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导,得到 IL-6 重组蛋白,利用镍柱亲和层析技术对蛋白进行纯化,并比对两个表达菌株的蛋白表达量,选择高表达菌株进行后续实验.结果 成功构建 6His-IL-6-pRSFDuet 原核表达质粒,根据蛋白表达比对情况选择 6His-IL-6-pET-28a(+)质粒进行后续实验,确定最适 IPTG 诱导浓度(0.2 mmol/L)、诱导温度(20℃)、诱导时间(20 h)等条件,在 BL21 中高效表达重组 IL-6 蛋白,纯化后的蛋白不仅可通过临床检测,且稀释倍数与检测结果之间呈线性关系.结论 成功获得低成本、高浓度、高纯度的 IL-6 重组蛋白,为后续 IL-6 标准物质和质控品的制备奠定了基础.
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关键词
白介素-6重组蛋白原核表达标准物质质控品interleukin-6recombinant proteinprokaryotic expressionreference materialquality control product
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-713X.2024.03.007
发布时间
2024-06-18
基金项目
北京市自然科学基金
北京医院科技新星项目
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