换一批摘要目的 建立自然杀伤细胞(NK 细胞)体外杀伤活性检测方法并进行验证.方法 以慢性髓源白血病细胞 K562 为靶细胞,使用5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA SE)标记后,将携带 CFSE 荧光的靶细胞按照不同的效靶比与 NK 细胞共培养.使用死细胞染料碘化丙啶(PI)与早期凋亡染料Annexin V 对共培养的细胞进行染色后,采用流式细胞仪对CFSE 荧光筛对靶细胞圈门,同步圈门 PI 检测其死亡率与Annexin V 检测早期凋亡率,计算杀伤率.对活细胞染料CFDA SE 与死细胞染料 PI 及早期凋亡染料 Annexin V使用量、检测限与定量限、准确度、重复性、再现性进行验证.结果 经过活细胞染料 CFDA SE 用量验证后,2×106 个K562 靶细胞的 CFDA SE 最佳使用量为 0.2 μL.PI 与Annexin V 的最佳使用量均为 1 μL/Test.靶细胞死亡与早期凋亡检出限为 0.1%,定量限为 0.5%.准确度、重复性、再现性验证结果均能满足 YY/T 0588《流式细胞仪》中表面标志物检测的重复性 a)阳性百分比≥30%时,CV 值应≤8%;或 b)阳性百分比＜30%时,CV 值应≤15%的要求.t 值与理论值符合 95%置信水平中的统计学要求.结论 建立的 NK 细胞体外杀伤活性检测方法符合标准化评价体系,为 NK 细胞功能检测与质量评价提供了参考依据.
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