基于GPER介导的EGFR/MEK/ERK途径探讨四物汤含药血清促进成骨细胞增殖的分子机制

Molecular mechanism of Siwu Decoction containing serum promoting proliferation of osteoblasts based on EGFR/MEK/ERK signaling pathway mediated by GPER

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摘要目的:探究四物汤对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1增殖的影响及其基于G蛋白偶联雌激素受体(GPER)介导的表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥效应的分子机制.方法:将20只雌性SD大鼠随机分为对照组,雌二醇(0.16 mg·kg-1·d-1)组,四物汤高、低剂量(2.08、0.52 g·kg-1·d-1)组.灌胃4 d后,经腹主动脉取血,制备含药血清.MTT法检测四物汤含药血清对MC3T3-E1细胞增殖的影响;Western blot法检测四物汤含药血清对MC3T3-E1细胞中EGFR/MEK/ERK信号通路相关蛋白EGFR、MEK、ERK1/2表达的调控作用.为了进一步明确GPER在四物汤影响成骨细胞增殖中的介导作用,在四物汤高剂量组中应用GPER特异性激动剂G1(终浓度1×10-8 mol/L)与抑制剂G15(终浓度1×10-8 mol/L)进行干预.结果:四物汤含药血清可促进MC3T3-E1细胞增殖(P＜0.01).与对照组比较,四物汤高剂量组可上调MC3T3-E1细胞中EGFR、MEK、ERK1/2蛋白表达水平(P＜0.01).与四物汤高剂量组比较,在加入G1后,上述蛋白表达进一步增高(P＜0.01);加入G15干预则会拮抗此效应,即升高的蛋白表达水平将有所下降(P＜0.05).结论:四物汤可以促进MC3T3-E1细胞增殖,该效应可能是通过在GPER的介导下,上调EGFR/MEK/ERK信号通路实现的.