补肾助孕方、逍遥丸含药血清对人子宫内膜微血管内皮细胞PI3K/Akt通路的影响
Effects of serum containing Bushen Zhuyun Formula and Xiaoyao Pills on PI3K/Akt pathway of microvascular endothelial cells in human endometrial
摘要目的:观察补肾助孕方(补肾法)、逍遥丸(疏肝法)含药血清对人子宫内膜微血管内皮细胞(HEMECs)PI3K/Akt通路的影响,探讨两法改善子宫内膜容受性的可能作用机制.方法:常规传代人子宫内膜微血管内皮细胞,2%正常人低血清培养24 h后,分别给予补肾助孕方、逍遥丸人含药血清预孵育24 h、以VEGF165细胞因子(40 ng/mL)刺激、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002孵育,设为正常组、VEGF组、补肾组、疏肝组、补肾+VEGF组、疏肝+VEGF组、抑制剂+VEGF组、补肾+抑制剂+VEGF组、疏肝+抑制剂+VEGF组.Western Blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、蛋白激酶-B(Akt)、磷酸化蛋白激酶-B(p-Akt)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测VEGF、VEGFR-2、eNOS mRNA表达,硝酸还原酶法检测培养液中一氧化氮(NO)含量.结果:补肾法、疏肝法上调HEMECs中VEGF、VEGFR-2、eNOS、Akt、p-Akt的蛋白表达,同时疏肝法上调eNOS蛋白表达优于补肾法(P<0.05).加入PI3K/Akt通路抑制剂后,疏肝组、补肾组的p-Akt、eNOS蛋白表达均降低(P<0.05).结论:疏肝法、补肾法能够增加VEGF的表达,激活PI3K/Akt信号通路,上调靶基因eNOS表达,从而促进血管通透性增加,达到改善子宫内膜容受性、提高胚胎着床率的作用.且提示疏肝法在提高血管通透性方面优于补肾法.
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