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基于MALDI-TOF MS和二代测序的VGⅠ型格特隐球菌的鉴定与基因组学分析

Identification and genomic analysis of Cryptococcus gattii VGⅠ genotype based on MALDI-TOF MS and next-generation sequencing

摘要目的 解析 VGⅠ型格特隐球菌的基因组特征,为其致病机制研究提供依据.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定分型隐球菌,应用 PCR 扩增进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);应用 Illumina 二代测序分析基因组特征、毒力因子及基因功能注释.结果 经检测,20 株隐球菌中 2 株研究菌株为 VGⅠ型格特隐球菌(得分2.01~2.21 分),其质谱图缺失新生隐球菌(6686、8633 Da)和 VGⅡ型格特隐球菌(9611 Da)的特征峰,PCA 聚类可明确进化关系.2 株 VGⅠ型菌的 MLST 型别为 ST565 和 ST57;基因组大小 18~20 Mb,GC 含量 47.85%~47.86%,存在多种毒力基因;通过URA5基因3个位点(469位C→A、547位T→G和562位 G→A)及SOD2基因136A→G突变可鉴定 VGⅠa/Ⅰb 亚型;KEGG 显著富集代谢、二级代谢生物合成、氨基酸合成和氧化磷酸化等通路;GO 差异蛋白富集高尔基体相关结构.结论 质谱能快速鉴定并分型 VGⅠ型格特隐球菌,测序揭示其基因组学特征,为其基因研究和致病机制探讨提供支撑.

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