换一批人真核表达质粒载体plenti6/v5-D-TOPO-TβRⅡDNglytk的构建及鉴定
Construction and Identification of a Eukaryotic Expression Vector pLenti6/V5-TOPO-TβR Ⅱ DNglytk
摘要目的:鉴于TGFβ在肿瘤发展过程中的负性免疫调节作用.使T淋巴细胞对TGFβ失去敏感性可以恢复其对肿瘤的杀伤活性.拟用含有TβRⅡDnglytk质粒的慢病毒来感染T淋巴细胞使其对TGFD失去敏感性后发挥抗肿瘤效应,因此我们首先构建含有TβRⅡDnglytk的人真核表达的慢病毒质粒载体plenti6/v5-D-TOPO-TβRⅡDnglytk.方法:从质粒上将TβRⅡ DN及HSV-tk克隆下来,重组PCR技术将其构建为融合蛋白TβRⅡDnglytk,琼脂糖凝胶电泳后切胶回收纯化;再利用TOPO克隆技术将其连接到慢病毒质粒pLenti6/V5-TOPO上,将质粒测序验证.结果:测序结果证明已将TβRⅡDN和HSV-tk构建成融合蛋白TβRⅡDnglytk并克隆到慢病毒载体plenti6/v5-D-TOPO中.成功构建了含TβRⅡDnglytk的人真核表达的质粒载体plenti6/v5-D-TOPO-TβRⅡDnglytk,经测序鉴定图谱正确.结论:成功构建了人真核表达的质粒栽体plenti6/v5-D-TOPO-TβRⅡDnglytk,联合应用重组PCR与TOPO克隆技术能够简单、高效、快速的构建慢病毒质粒.
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