换一批
换一批siRNA特异性沉默TPX2基因对人宫颈腺癌Hela细胞体外生长的影响
Effect of Specific TPX2-siRNA on Growth of Human Cervical Adenocarcinoma Hela Cells in vitro
摘要目的:应用TPX2-siRNA转染Hela细胞,探讨TPX2基因沉默后对Hela细胞增殖和侵袭力及周期分布的影响.方法:合成TPX2特异性的siRNA 4对,随机siRNA阴性对照1对.Lipofectamine 2000介导siRNA转染Hela细胞株.RT-PCR检测转染前后mRNA表达的变化,Western blot检测转染前后蛋白表达的变化,MTT、流式细胞术 (FCM)、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验观察细胞增殖、周期、及侵袭能力的变化.结果:在600μL转染体积中,在siRNA浓度为20μmoL/L时,siRNA和Lipo-ectamine2000以2.5:2比例搭配时,转染效率最高,24h为 (98.33±1.53) %.TPX2mRNA沉默效果尤以TPX2-siRNA4最强达(82.5±0.43) %,其蛋白表达水平明显降低,抑制率达 (63.4±1.05) %.TPX2-siRNA4转染组发生了明显的细胞周期S期停顿现象,细胞增殖受到显著抑制.TPX2-siRNA4转染组穿膜细胞为13.33±1.53显著低于空白对照组54.33±2.52和阴性对照组53.00±4.00(P<0.05).结论:siRNA干扰TPX2后能抑制Hela细胞增殖和侵袭,影响其周期分布,因此TPX2可以作为人宫颈腺癌基因治疗的候选靶点.
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