囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用

Inhibitory Effects of VAP33 on Malignant Behaviors of Murine Dendritic Cell Sarcoma

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摘要目的:探讨囊泡膜蛋白相关蛋白(VAP33)过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响.方法:反转录获得VAP33 cDNA,利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体(pWPXL-VAP33),在脂质体Lipofectamine 2000介导下与辅助质粒(PsPAX2、MD2G)共转染293T细胞包装生产重组慢病毒.取病毒上清感染内源性低表达VAP33的DG6细胞,通过荧光显微镜挑选、Western-blot鉴定获得VAP33稳定过表达的阳性单克隆细胞株(DG6-VAP33).MTT法检测细胞增殖情况,Transwell和集落形成检测肿瘤细胞体外侵袭、成瘤能力.同时建立小鼠皮下移植瘤模型,连续6周观察VAP33过表达对活体内肿瘤细胞生长、成瘤、转移能力的影响.结果:重组慢病毒表达载体pWPXL-VAP33构建成功,包装滴度达6×107IU/mL,感染DG6细胞后筛选到VAP33稳定过表达细胞株(DG6-VAP33).与DG6细胞相比,DG6-VAP33细胞体外增殖减慢,每孔集落数分别为(52±8)个和(36±5)个(P<0.05);Transwell方法观察到,DG6-VAP33细胞体外侵袭能力显著下降,穿膜细胞数(14±11)个少于DG6(36±17)个(P<0.01).通过6周的连续观察,DG6-VAP33组肿瘤生长速度显著慢于DG6组,成瘤率50%(5/10)、肺转移率(0)也明显降低(DG6组成瘤率100%、肺转移率80%).结论:VAP33过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、成瘤及侵袭转移能力.