换一批靶向T细胞的工程化外泌体在体生成CD19 CAR-T细胞及其对淋巴瘤细胞的杀伤研究
In vivo production of anti-CD19 CAR-T cells with T cell-targeted engineered exosomes to evaluate cytotoxicity against lymphoma cells
摘要目的:嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)免疫疗法在血液肿瘤治疗方面取得了重大突破,但目前的CAR-T细胞疗法仍存在局限性,如需采集患者本人细胞,存在制备周期长、价格昂贵且慢病毒转导存在插入致癌风险.因此,迫切需要构建一种通用型的、能定向转染体内T细胞生成CAR-T细胞的肿瘤免疫治疗新方法.方法:本研究通过构建外泌体靶向递送系统.通过与人PBMC细胞共孵育探索外泌体生成CAR-T细胞的最佳转染剂量及CAR分子表达随时间动力学曲线;利用钙黄绿素法检测CAR-T细胞的杀伤能力;通过尾静脉注射外泌体至肿瘤动物模型体内来评价其在体内的抗肿瘤效果及安全性.结果:本研究成功建立了能够特异性靶向人CD3+、CD4+、CD8+T细胞的靶向外泌体.外泌体与PBMC孵育结果表明外泌体靶向生成CAR-T与剂量呈正相关,剂量在 106 粒子/细胞时转染效率最高可达到 97.8%;体外细胞毒性实验及体内动物实验结果表明经外泌体孵育构建的CAR-T细胞能够特异性杀伤CD19阳性的Raji细胞.结论:本研究所建立的外泌体靶向递送系统能够成功将CD8+T细胞改造成CAR-T细胞,在体外和小鼠体内均具有显著肿瘤杀伤能力,与传统慢病毒载体体外制备CAR-T细胞的方式相比,转染效率更高、消除了病毒插入存在致癌风险、生产周期短成本更低、成药后可实现药物的现货供应,大幅加速了CAR-T细胞免疫治疗的通用性和实用性.
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关键词
在体生成CAR-T细胞靶向CD8外泌体递送系统小鼠人源化建模B淋巴瘤细胞系in vivo generation of CAR-T cellsCD8-targeted exosome delivery systemhumanized mouse modelB lymphoma cell line
栏目名称
DOI
10.12354/j.issn.1000-8179.2025.20250297
发布时间
2025-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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