小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定

Enrichment and identification of cancer stem cell-like cells in mouse breast cancer cell line 4T1

导出 OA 学术成果认领

摘要目的:无血清培养基(serum-free medium,SFM)悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞.方法:通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基(serum-supplemented medium,SSM),观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况.应用细胞表面标志CD44+CD24-/low和Hoechst 33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例,小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力.结果:4T1细胞在SFM中能够存活、增殖,并形成细胞球,细胞球可连续传代,若重新接种于SSM中可贴壁分化.4T1细胞球中CD44+CD24-/low细胞比例为6.4%～68.9%,侧群(side population,SP)细胞比例为7.3%～61.2%,均显著高于SSM中培养的4T1细胞(P<0.05);随着SFM中细胞球传代次数增加,CD44+CD24-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高.小鼠致瘤实验结果显示,富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强.结论:乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球,4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集.