RNA干扰沉默PIN1对肺癌A549细胞增殖、细胞周期和成瘤的影响

Effect of RNA interference-based silencing of PIN1 gene on proliferation,cell cycle and tumorigenicity of lung cancer A549 cells

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摘要目的:应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中PIN1(protein interacting with N1MA1)基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响.方法:构建靶向PIN1基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo,以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定沉默PIN1基因的细胞株.Real-time PCR和Western blotting验证PIN1基因在mRNA和蛋白水平的表达,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布.将稳定沉默PIN1的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况.结果:成功构建了 pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体,转染A549细胞并筛选获得稳定克隆.稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中PIN1,mRNA表达最较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了89.3%;蛋白表达同时也显著抑制.PIN1基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降(P<0.01),细胞出现G1期阻滞.小鼠体内实验显示,PIN1沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低(P<0.01).结论:pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默PIN1基因的表达,从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力.