桥接整合因子1去甲基化诱导细胞周期阻滞抑制食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖

Demethylation of bridging integrator-1 inhibits proliferation of the esophageal squamous cell carcinoma EC109 cell through inducing cell cycle arrest

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摘要目的:分析桥接整合因子1 (bridging integrator-1,Bin1去甲基化对Bin1基因表达和食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测去甲基化药物5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)处理后EC109细胞Bin1启动子区域的甲基化状态,用qPCR、Westem blotting和MTT法分别检测单独5-Aza-dc和5-Aza-dc加转染Bin1基因干扰片段(Bin1 siRNA)处理对EC109细胞Bin1 mRNA及其蛋白表达和细胞增殖能力的影响,流式细胞术和Western blotting检测5-Aza-dc处理后EC109细胞周期和细胞周期相关蛋白(CyclinDl与CDK4)表达的变化.结果:去甲基化药物5-Aza-dc处理后,EC109细胞Bin1基因启动子区域发生去甲基化.5-Aza-dc处理的Bin1去甲基化EC109细胞Bin1 mRNA和蛋白表达明显上调(均P＜0.05),细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),细胞阻滞在G0/G1期,表现为S期细胞比例显著减少,细胞周期相关蛋白CyclinD、CDK4表达均明显下调(均P＜0.05).Bin1去甲基化EC109细胞转染Bin1 siRNA后,Bin1 mRNA和蛋白表达明显下调,细胞增殖能力增强(均P＜0.05).结论:Bin1基因启动子区域在EC109细胞中呈完全甲基化状态,5-Aza-dc去甲基化可使食管鳞癌细胞EC109细胞Bin1表达升高,通过降低细胞周期相关蛋白表达诱导细胞周期阻滞抑制EC109细胞增殖.证实表观遗传学变化可能与食管癌细胞恶性增殖有关,可为食管癌治疗提供新的思路.

作者刘天旭 ^[1] 张翔宇 ^[1] 邓佳 ^[1] 王雪晓 ^[1] 王佳丽 ^[1] 刘丽华 ^[1] 学术成果认领

作者单位河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科,河北石家庄,050035 ^[1]

关键词食管鳞状细胞癌 EC109细胞甲基化桥接整合因子1基因细胞增殖细胞周期 esophageal squamous cell carcinoma (ESCC)EC109 cell methylation bridging integrator-1 gene (Bin1)cell proliferation cell cycle

主题词甲基化(Methylation)细胞(Cells)细胞增殖(Cell Proliferation)食管(Esophagus)癌, 鳞状细胞(Carcinoma, Squamous Cell)

分类号 R735.1 R730.2

栏目名称 基础研究

DOI 10.3872/j.issn.1007-385x.2017.11.002

发布时间 2018-01-03

基金项目

国家自然科学基金资助项目 河北省杰出青年基金资助项目 河北省高层次人才培养项目资助(No.A201401040). Project supported by the National Natural Science Foundation of China the Outstanding Youth Foundation of Hebei Province the Foundation for High Level Talents of Hebei Province