桦木酸通过抑制STAT3的活化提高胰腺癌细胞对吉非替尼的敏感性

Betulinic acid enhances gefitinib-sensitivity of pancreatic cancer cells via inhibi-tion of STAT3 activation

摘要目的:探讨桦木酸(BEA)提高胰腺癌Panc-1、Miapaca-2细胞对吉非替尼的敏感性及其潜在的作用机制.方法:细胞培养完成后,将对吉非替尼不敏感的Panc-1、Miapaca-2细胞随机分为4组:对照组、BEA组、吉非替尼组及BEA联合吉非替尼组,分别予以不处理、BEA、吉非替尼及BEA联合吉非替尼处理.MTS法检测BEA对2种细胞的增敏效果,集落形成实验检测BEA协同吉非替尼的治疗效果,WB实验检测BEA对Panc-1细胞凋亡相关蛋白的影响,流式细胞术检测BEA对Panc-1细胞凋亡的影响,表面等离子体共振(SPR)实验验证信号转导子和转录激活子3(STAT3)和BEA的直接结合,分子对接和分子动力学模拟实验预测STAT3和BEA的结合模式.结果:BEA协同增强Panc-1、Miapaca-2细胞对吉非替尼的敏感性(P<0.05),使其对两种细胞的IC50值均降低至原值的50％以下.吉非替尼联合BEA较单用吉非替尼或BEA促进Panc-1细胞的凋亡以及凋亡相关蛋白cleaved-PARP和Bax的表达,减少对凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达(均P<0.05或P<0.01).BEA对Panc-1细胞中STAT3的活化有剂量依赖性抑制作用(P<0.01).BEA通过与STAT3的Lys-591、Ser-613形成氢键而稳定BEA与STAT3的结合作用,同时BEA稳定在STAT3的蛋白结合位点内,以此阻断STAT3二聚发挥增敏作用.结论:联用BEA和吉非替尼显著抑制胰腺癌Panc-1、Miapa-ca-2细胞的增殖并促进其凋亡,这种增敏作用可能是由BEA对STAT3抑制作用所介导.