换一批融合PE38的抗CD70纳米抗体免疫毒素的制备及其对肾透明细胞癌786-O细胞的杀伤作用
Preparetion of anti-CD70 nanobody immunotoxin fused with PE38 and its killing effect on renal clear cell carcinoma 786-O cells
摘要目的:构建靶向CD70分子的重组免疫毒素,通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白,体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性.方法:通过基因工程手段,将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个连接子与pET21a-PE38基因片段相连,获得重组表达载体pET21a-Nb 2B3-PE38并转入BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、纯化与鉴定.用间接ELISA及FACS法检测Nb 2B3-PE38与CD70分子的结合活性,MTT法检测Nb 2B3-PE38对高表达CD70分子的肾透明细胞癌786-O细胞的体外杀伤活性,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测Nb 2B3-PE38对786-O细胞凋亡的影响.结果:成功构建抗CD70纳米抗体重组免疫毒素Nb 2B3-PE38,纯化获得纯度>90%的重组蛋白,SDS-PAGE及WB检测结果表明目的蛋白正确表达,分子量为56 000.纯化后的Nb 2B3-PE38能与重组CD70抗原及786-O细胞表面的CD70分子特异性结合;25 μg/mL Nb 2B3-PE38即对786-O细胞产生极显著的杀伤作用(P<0.001),并且促进786-O细胞的细胞凋亡(P<0.01),其杀伤效应强于阳性对照顺铂(P<0.01).结论:成功制备了特异性靶向CD70分子的免疫毒素Nb 2B3-PE38,其能够有效杀伤786-O细胞并诱导细胞凋亡且效果强于顺铂.
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关键词
CD70铜绿假单胞杆菌外毒素纳米抗体PE38重组免疫毒素肾透明细胞癌786-O细胞细胞毒性靶向治疗CD70pseudomonas aeruginosa exotoxinnanoantibodyPE38recombinant immunotoxinrenal clear cell carcinoma786-O cellcytotoxicitytargeted therapy
栏目名称
DOI
10.3872/j.issn.1007-385x.2023.08.003
发布时间
2023-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.31570935）
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