换一批基于噬菌体展示技术筛选鉴定HLA-G肿瘤靶向锚定蛋白
Screening and identification of HLA-G tumor-targeting ankyrins based on phage-display technology
摘要目的:基于噬菌体展示靶向锚定蛋白文库,以人白细胞抗原G(HLA-G)为靶点筛选锚定序列作为HLA-G结合蛋白(HGBP)并评价其功能.方法:利用TCGA、GTEx等数据库分析肿瘤组织中HLA-G表达与临床预后和免疫浸润的相关性.利用噬菌体展示靶向锚定蛋白文库对HLA-G胞外片段进行生物淘选并随机挑取单克隆进行测序.通过ELISA、免疫荧光染色鉴定优势噬菌体克隆的功能.利用原核体系生产纯化HGBP,通过ELISA、表面等离子共振(SPR)、免疫荧光染色法评价其亲和力及肿瘤特异性结合能力.结果:生物信息学分析发现,HLA-G在肿瘤组织中普遍呈高表达,其与临床总生存期、免疫细胞浸润水平具有相关性(P<0.05).5轮噬菌体文库筛选后获得优势克隆,ELISA及免疫荧光染色结果均显示,优势噬菌体对HLA-G阳性细胞结合显著强于阴性细胞(P<0.05,P<0.001).经纯化生产的HGBP与HLA-G之间的亲和力可达17 nmol/L,ELISA结果显示,HGBP与HLA-G分子的结合显著(P<0.05);免疫荧光染色结果表明,HGBP能与HLA-G阳性细胞特异性结合(P<0.01).结论:经噬菌体展示文库筛选出的HGBP对HLA-G具有高亲和力,可特异性结合肿瘤细胞表达的HLA-G.
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关键词
人白细胞抗原G噬菌体展示文库靶向锚定蛋白肿瘤靶向治疗human leukocyte antigen-G(HLA-G)phage-display librarytargeting proteincancer targeted therapy
栏目名称
DOI
10.3872/j.issn.1007-385x.2025.07.003
发布时间
2025-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.82272811）
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