摘要目的:制备低亲和力的CD117 CAR-T细胞,探讨其对急性髓系白血病(AML)细胞Kasumi-1的体外杀伤效应.方法:调取CD117低亲和力抗体巴佐利单抗(barzolvolimab)和Fab-79D VH和VL序列,设计VH-(G4S)3-VL结构的单链抗体,分别构建带4-1BB共刺激分子的经典二代CAR分子,经基因合成后分别亚克隆至pMFG逆转录病毒载体,获得CD117-79D CAR和CD117-0159 CAR质粒.将两种CAR质粒分别包装制备逆转录病毒,检测其滴度合格后转导活化后的T细胞,构建CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞,采用流式细胞术检测两种CAR-T细胞的阳性率.将未转导T细胞与两种CAR-T细胞分别与CD117+Kasumi-1细胞共培养,通过流式细胞术检测Kasumi-1细胞凋亡率,以评估两种CAR-T细胞的抗肿瘤活性.结果:成功构建CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞,其阳性率分别为(59.4±2.6)%、(62.5±1.2)%.未转导T细胞、CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞体外培养均能稳定增殖,且三者的增殖能力均无显著差异(均P>0.05).体外杀伤Kasumi-1细胞结果显示,不同效靶比条件下,CD117-79D CAR-T和 CD117-0159 CAR-T细胞较未转导T细胞展现出显著增强的杀伤能力(P<0.05或P<0.01),但两种CAR-T细胞的杀伤效率无显著差异(P>0.05).结论:成功构建低亲和力的CD117-79 CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞,体外实验证实其可有效杀伤CD117+Kasumi-1细胞,为AML的靶向治疗提供了实验依据.