摘要目的:建立一种以乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)病毒样颗粒(VLP)为骨架,嵌合PD-1B细胞表位的重组颗粒蛋白,研究其对小鼠结直肠癌(CRC)的抑制效果.方法:设计PD-1 HBcVLP质粒并导入BL21(DE3)获得重组PD-1 HBc VLP表达菌株后,通过优化培养温度,实现蛋白可溶性表达,经硫酸铵沉淀、Sepharose 4 Fast Flow尺寸排阻层析和DEAE阴离子树脂层析纯化获得高纯度的PD-1 HBcVLP.采用电泳、WB、HPLC及电镜手段对其表达水平、蛋白纯度、颗粒形成率、形态特征及抗原结合活性等特征进行系统表征,ELISA测定免疫小鼠后的血清效价,评价其免疫原性,构建CT26细胞CRC小鼠移植瘤模型,通过监测PD-1 HBc VLP治疗后小鼠体质量和肿瘤体积变化,评估PD-1 HBc VLP抗肿瘤活性.结果:在28 ℃条件下,可溶性目的蛋白表达量占总蛋白的10.27％,多步纯化后目的蛋白纯度为(91.77±0.62)％,分子量为23000,电镜测定粒径为(31.90±1.88)nm,粒径仪测定粒径为(30.66±0.62)nm,多分散指数(PDI)为(0.18±0.05).WB结果显示,PD-1 HBc VLP重组蛋白可分别与HBcVLP抗血清和PD-1抗体结合.ELISA结果显示,经PD-1 HBcVLP 3次免疫后,第14天小鼠血清中总抗体效价为1∶640 000,其中抗PD-1的效价为1∶40 000.抗肿瘤实验表明,PD-1 HBc VLP组小鼠的肿瘤抑制率为(27.99±2.98)％,对照组在45 d全部死亡,PD-1 HBc VLP组中位生存期延长20 d.结论:成功制备了以HBcVLP为骨架,嵌合PD-1 B细胞表位的PD-1 HBc VLP,且对小鼠结直肠癌有治疗效果.