换一批
换一批摘要目的:体外表达并纯化Cyr61蛋白片段.方法:提取乳腺癌组织总RNA,用一步法RT-PCR选择扩增编码Cyr61蛋白的cDNA片段,并将之克隆到融合蛋白表达载体pQESOL中,转染大肠杆菌Rosetta-gamiTM2.异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用亲和层析法纯化.纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹分析鉴定.结果:克隆到编码Cyr61蛋白片段的cDNA片段,其大小为930 bp.构建的表达质粒pQE80-Cyr61经限制性内切酶酶切和DNA测序证实为所需要的质粒.表达出相对分子质量分别为32 kD的可溶性融合蛋白,经蛋白质印迹分析鉴定为Cyr61的融合蛋白.结论:本实验克隆了编码Cyr61蛋白片段的eDNA序列,并成功地获得了可溶性表达的融合目的蛋白,为进一步制备抗Cyr61蛋白的抗体和建立Cyr61蛋白定量检测方法创造了条件.
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