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基于TFAM-mtDNA信号通路调控线粒体氧化磷酸化研究加味旋覆代赭汤抑制食管癌前病变的机制

The efficacy and mechanism of Jiawei Xuanfu Daizhe decoction in treating esophageal precancerous lesions

摘要目的:探讨加味旋覆代赭汤(JXDD)通过线粒体转录因子A(TFAM)-线粒体DNA(mtDNA)信号通路调控线粒体氧化磷酸化功能抑制食管癌前病变的作用机制.方法:100只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、JXDD低剂量组、JXDD高剂量组.除正常组,其余组建立食管癌前病变模型并予以相应药物治疗8周.末次给药后取材,苏木精-伊红(HE)染色观察食管组织病理学;蛋白质印迹法(Western blot)检测组织中mtDNA编码蛋白细胞色素氧化酶(COX)1和COX2、TFAM表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测组织中细胞质基质内TFAM表达;定量聚合酶链式反应(qPCR)检测mtDNA拷贝数.构建食管癌前病变细胞系与热体克蛋白70敲低(siHSP70)食管癌前病变细胞系并用JXDD含药血清干预,利用Western blot检测细胞内HSP70、细胞质基质及线粒体内TFAM表达,qPCR检测mtDNA拷贝数进行验证.结果:与模型组比较,JXDD治疗后食管黏膜组织增生与炎症细胞浸润减轻,病理评分降低(P<0.05);Western blot、ELISA、qPCR结果显示JXDD组食管组织线粒体内TFAM表达升高(P<0.05),细胞质基质内TFAM表达降低(P<0.05),mtDNA拷贝数升高(P<0.05),mtDNA相关编码蛋白COX1与COX2表达增加(P<0.05).成功构建对应细胞模型,Western blot和qPCR成功验证JXDD降低细胞质基质TFAM表达、增加线粒体内TFAM表达、增加mtDNA拷贝数(P<0.05).结论:加味旋覆代赭汤促使TFAM在线粒体富集,增加mtDNA拷贝数与表达量,保护电子传递链的完整性,改善线粒体氧化磷酸化,抑制食管癌前病变.

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