摘要目的 本研究旨在比较微流控精密肝切片培养体系与静态精密肝切片培养体系,通过肝细胞功能、形态和代谢能力等方面研究,筛选出更适用于中药毒理学研究的体外培养技术体系.方法 动态监测两种体系内肝细胞功能相关生化指标、microRNA-122(miR-122)基因和细胞色素 P450 家族基因(CYP3A4、CYP2E1、CYP1A2)转录水平及组织学和超微结构的变化,观察组织学和超微结构,系统比较微流控和静态体系中肝细胞的各方面特性,从而筛选出更优的精密肝切片培养体系.结果 采用重复测量的方差分析,发现微流控体系培养液中的碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)等肝细胞损伤指标水平显著低于静态体系(P<0.001);丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平高于静态体系(P<0.001);总蛋白(TP)和胆固醇(CHO)等肝脏合成能力相关指标含量显著高于静态体系.组织学观察显示,微流控体系中,培养24 h 后肝组织结构未见显著异常,培养3 d 后肝细胞出现肿胀等现象,培养 5 d 后肝小叶结构尚存但大面积细胞核消失;而静态体系中,培养 6 h 后肝组织结构未见显著异常,培养 12 h 后肝窦扩张,培养3 d 后大面积细胞核消失且肝细胞坏死.电镜观察发现,微流控体系中,培养6 h 后肝细胞超微结构未见明显异常,培养24 h 后线粒体嵴减少等.RT-qPCR 结果显示,培养 2 h 时微流控体系中 miR-122 的相对转录水平显著高于静态体系(P<0.001),且微流控体系中的miR-122 基因转录水平显著高于静态体系(P<0.001).培养12 h,微流控体系中CYP1A2 的mRNA 水平显著高于静态体系(P<0.001),微流控体系中的 CYP1A2 基因转录水平显著高于静态体系(P<0.01).结论 动态监测不同体系培养的精密肝切片后发现,与静态体系相比,微流控体系中肝细胞的功能损伤更小、结构相对完整、代谢能力更强,微流控体系更利于精密肝切片的培养,更适用于中药毒理学研究.