基于AA-Ⅰ代谢中oatp2b1动态表达探讨脾虚证湿浊转运的机制

Exploring on Mechanism of Dampness Transporaton by Observing Dynamic Expression of Organic Anion Transporting Polypeptide 2b1 based on Metabolism of AA-Ⅰ in Spleen-Deficiency Rats

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摘要目的:通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(Aristolochic acid-Ⅰ,AA-Ⅰ)的代谢与肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠7种组织中有机阴离子转运肽oatp2b1基因及蛋白表达的关系探讨中医温浊转运的内涵.方法:48只SD大鼠随机分为空白组、脾虚组、空白+AA-Ⅰ组、脾虚+AA-Ⅰ组.脾虚组及空白组分别做AA-Ⅰ药代动力学检测,并分别取肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠组织;空白+AA-Ⅰ组及脾虚+AA-Ⅰ组予AA-Ⅰ灌胃后5、60分钟两个时间点取上述组织,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化的方法检测各组织中oatp2b1的基因及蛋白表达情况.结果:空白组与脾虚组AA-Ⅰ血药浓度出现明显差异(P＜0.05).oatp2b1 mRNA表达:脾虚组中脾组织表达量较空白组降低(P＜0.05);空白+AA-Ⅰ组5分钟时与空白组比较各组织表达无差异,60分钟小肠组织表达量较空白组降低(P＜0.05);脾虚+AA-Ⅰ组5分钟时胃、肝组织表达量较脾虚组降低(P＜0.05),60分钟时肾、大肠组织表达量较脾虚组升高(P＜0.05).oatp2b1蛋白表达变化趋势同基因表达改变基本一致;oatp2b1蛋白分布:肝组织中肝血窦周边的肝细胞及巨噬细胞的细胞膜染色阳性,胃组织中消化腺的胞质染色阳性,肾组织中肾小管包膜及胞浆染色阳性,小肠组织消化腺中胞质及包膜染色阳性,大肠组织胞膜染色阳性.结论:AA-Ⅰ代谢与肝、胃、肾、小肠、大肠组织oatp2b1表达相关,提示湿浊代谢以脾为枢纽,肝、胃、肾、大肠、小肠共同参与并发挥相应协调作用.