三黄三仙汤治疗再生障碍性贫血的作用机制研究
Study on the Mechanism of Sanhuang Sanxian Decoction(三黄三仙汤)in the Treatment of Aplastic Anaemia
摘要目的:探讨三黄三仙汤治疗再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA)的作用机制.方法:对脾淋巴细胞进行分离纯化,获取Naive CD4+T细胞,然后诱导产IL-17 的辅助性T细胞(IL-17-producing T helper,Th17)分化.采用流式细胞术分析CD4+T细胞的免疫表型,并通过光学显微镜评估其形态变化.CCK8 检测不同浓度三黄三仙汤含药血清处理后的细胞活力,流式细胞术鉴定各组调节性 T 细胞(Regulatory T cells,Treg)和Th17 细胞分化情况,采用酶联免疫吸附试验检测细胞中IL-17A、IL-10 和IL-21 的含量,qPCR检测细胞中IL-17F、T-bet mRNA表达,Western blot检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)、类视黄醇相关孤儿受体γt(Retinoid-related orphan receptor gamma t,RORγt)、转录因子叉头盒蛋白3(Transcription factor forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达.结果:CCK8 结果显示,10%含药血清为最适血清浓度.与模型组比较,三黄三仙汤含药血清组、淫羊藿苷组中Th17 细胞占比显著下降,而Treg细胞的占比则显著上升;IL-17A和IL-21 的含量显著下降,IL-10 的含量显著上升;IL-17F、T-bet mRNA的表达水平显著降低;PPARγ、Foxp3蛋白表达显著升高,RORγt蛋白表达显著降低.而加入PPARγ抑制剂T0070907 后则出现相反的趋势.结论:三黄三仙汤能够有效改善AA,其作用机制可能与激活PPARγ,引起Foxp3/RORγt通路失调有关.
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