基于大鼠泪腺组织形态及相关蛋白表达探讨生脉散的抗燥效应
Exploring the Anti-dryness Effect of Shengmai Powder Based on Morphological and Protein Expression in Rat Lacrimal Glands
摘要目的 基于大鼠泪腺S100钙结合蛋白A9(S100A9)、丛生蛋白(Clu)、膜联蛋白A1(Anxa1)表达、组织形态及细胞凋亡探讨生脉散的抗燥效应.方法 30只大鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)和生脉散组(SM),每组10只.CG组大鼠饲养在标准环境中,MG组、SM组大鼠置于人工气候箱内,予秋令燥邪的干燥环境干预.同时,SM组大鼠以8.57 g/kg的剂量每日灌胃生脉散水煎液,CG组、MG组予等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,连续干预24 d.观察干预期间大鼠的外观和一般状态.干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠泪腺组织形态,原位末端转移酶标记法(TUNEL)观察大鼠泪腺细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测大鼠血清S100A9、Anxa1、Clu蛋白表达,免疫组织化学法和Western Blot法分别检测大鼠泪腺组织S100A9、Anxa1、Clu蛋白表达.结果 (1)一般状态:MG组、SM组大鼠孔窍清洁,皮毛略晦暗无打结,眼部均呈深红色,且MG组大鼠轻微掉毛,个别大鼠肺部发出低微的异常呼吸音.(2)泪腺组织形态:MG组和SM组泪腺小叶萎缩,腺泡融合,腺腔增大,腺泡间散见炎性浸润等,且SM组病理改变程度较轻.(3)泪腺细胞凋亡:MG组大鼠泪腺细胞凋亡个数高于CG组(t=7.306,P=0.000),SM组大鼠泪腺细胞凋亡个数低于MG组(t=7.306,P=0.000),差异均有统计学意义.(4)泪腺相关蛋白:MG组大鼠泪腺S100A9、Anxal、Clu蛋白表达均高于CG组(免疫组织化学:tS100A9=29.045、tAnxa1=12.719、tClu=20.776,均P=0.000;Western Blot:tS100A9=15.550、tAnxa1=14.393、tClu=18.553、均P=0.000),SM组大鼠泪腺S100A9、Anxal、Clu蛋白表达均低于MG组(免疫组织化学:tS100A9=16.981、tAnxa1=7.174、tClu=10.176,均P=0.000;Western Blot:tS100A9=9.537、tAnxa1=7.354、tClu=11.901,均P=0.000),差异均有统计学意义.(5)血清相关蛋白:MG组大鼠血清Anxal蛋白表达高于CG组,差异有统计学意义(t=2.520,P=0.020),而SM组大鼠血清Anxal蛋白较MG组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 生脉散可通过调节燥邪大鼠泪腺S100A9、Anxa1、Clu蛋白表达,发挥减轻细胞凋亡、缓解腺体萎缩、减轻局部炎症等效果,具有一定拮抗燥邪的作用,S100A9、Anxa1、Clu可能为生脉散治疗外燥证的靶点蛋白.
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