丹芪化瘀方对光诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响
Effects of Danqi Huayu For-mula on Oxidative Stress in Light-induced Human Retinal Pigment Epithelium Cells
摘要目的 观察丹芪化瘀方对光诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激的影响,探讨其保护视网膜的作用机制.方法 2组大鼠分别以31.05 g/kg丹芪化瘀方中药颗粒水溶液和等体积蒸馏水灌胃,制备含药血清和空白血清.常规培养的RPE细胞使用白色发光二极管(LED)冷光灯于(7,500±200)LUX光照强度的下直落式照射12 h,建立RPE细胞光损伤模型,随机分为模型组(MG)、低剂量丹芪化瘀方组(L-DQHY)、中剂量丹芪化瘀方组(M-DQHY)、高剂量丹芪化瘀方组(H-DQHY),另将采用锡纸遮光的对照细胞设为对照组(CG).CG组细胞不加任何试剂,MG组细胞加入大鼠空白血清,L-DQHY组、M-DQHY组、H-DQHY组细胞分别加入4%、8%、16%浓度的丹芪化瘀方大鼠血清,培养24 h.细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞活性,流式细胞仪检测活性氧(ROS)表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平.结果 (1)细胞活性:MG组细胞活性低于CG组(t=13.592,P=0.000),M-DQHY组、H-DQHY组细胞活性高于MG组(tM-DQHY=3.910,P=0.001;tH-DQHY=9.028,P=0.000),差异均有统计学意义.(2)ROS:MG组ROS表达水平高于CG组(t=13.457,P=0.000),L-DQHY组、M-DQHY组、H-DQHY组ROS表达水平低于MG组,(tL-DQHY=7.697、tM-DQHY=8.325、tH-DQHY=13.219,均P=0.000),差异均有统计学意义.(3)NOX4 mRNA:MG组NOX4 mRNA表达水平高于CG组(t=42.469,P=0.000),L-DQHY组、M-DQHY组、H-DQHY组NOX4 mRNA表达水平低于MG组(tL-DQHY=17.238、tM-DQHY=28.764、tH-DQHY=35.210,均P=0.000),差异均有统计学意义.(4)SOD、GSH-Px、MDA:MG组MDA表达水平高于CG组(t=50.375,P=0.000),SOD、GSH-Px表达水平低于CG组(tSOD=39.847、tGSH-Px=45.431,均P=0.000);L-DQHY组、M-DQHY组、H-DQHY组MDA表达水平低于MG组(tL-DQHY=13.821、tM-DQHY=20.223、tH-DQHY=40.067,均P=0.000),SOD、GSH-Px表达水平高于MG组(SOD:tL-DQHY=8.913、tM-DQHY=14.019、tH-DQHY=28.395,均P=0.000;GSH-Px:tL-DQHY=7.860、tM-DQHY=20.350、tH-DQHY=34.127,均P=0.000),差异均有统计学意义.结论 丹芪化瘀方能下调NOX4/ROS信号通路相关蛋白的表达,减少MDA表达,增加SOD、GSH-Px的表达,起到有效拮抗LED对RPE细胞的氧化损伤作用.
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