摘要目的 探讨铅对TK6细胞DNA损伤的遗传毒性与同源重组修复蛋白RAD51在铅诱导TK6细胞DNA双链断裂中的修复作用.方法 (1)选择对数生长期TK6细胞分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组5组,前4组分别采用浓度为0、120、240、480 μmol/L的醋酸铅处理,阳性对照组予浓度为100 μmol/L过氧化氢溶液处理.各组细胞经冰上孵育24 h后,采用免疫荧光法检测细胞磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)阳性率,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EDU)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测RAD51蛋白表达.(2)对TK6细胞构建短发夹RNA(shRNA)沉默RAD51模型,分为未处理组(正常TK6细胞)、阴性对照组(sh-NC)和RAD51沉默组(sh-RAD51),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测RAD51的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测RAD51蛋白表达,验证干扰效果.(3)采用浓度为480 μmol/L醋酸铅处理正常TK6细胞、对照序列sh-NC和干扰序列sh-RAD51 24 h,分别设为铅处理组、铅+阴性对照组和铅+RAD51沉默组,另设未经醋酸铅处理正常TK6细胞的对照组,分别采用免疫荧光法与Western blotting法检测各组细胞γ-H2AX阳性率和RAD51蛋白表达.结果 (1)随醋酸铅处理浓度的增加,TK6细胞γ-H2AX的阳性率增加(P值均<0.05),EDU阳性细胞比例降低(P值均<0.05),S期细胞比例降低(P值均<0.05).高剂量组、阳性对照组细胞G1期细胞比例分别高于低剂量组和中剂量组(P值均<0.05);与空白对照组比较,中剂量组、高剂量组和阳性对照组细胞G2期细胞比例均增加(P值均<0.05),但3个剂量组细胞G2期比例两两比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05).TK6细胞凋亡率和RAD51蛋白相对表达水平均随醋酸铅处理浓度增加而增加(P值均<0.05).(2)RAD51沉默后,RAD51沉默组细胞的RAD51 mRNA和RAD51蛋白相对表达水平均低于未处理组与阴性对照组(P值均<0.05).(3)与对照组、铅处理组和铅+阴性对照组比较,铅+RAD51沉默组细胞γ-H2AX阳性率均升高(P值均<0.05),RAD51蛋白相对表达水平均下降(P值均<0.05).结论 铅处理TK6细胞可诱导细胞DNA双链断裂,抑制细胞增殖,导致细胞周期阻滞和细胞凋亡,呈一定的剂量-效应关系.RAD51基因下调可导致同源重组修复途径受抑制,进而增加TK6细胞DNA对铅诱导损伤的敏感性.