基于网络药理学、分子对接和实验验证的三叶青治疗肝细胞癌作用机制研究

Study on the Mechanism of Tetrastigma hemsleyanum against Hepatocellular Carcinoma Based on Network Pharmacology,Molecular Docking and Experimental Verification

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摘要目的通过网络药理学方法研究三叶青治疗肝细胞癌(HCC)的作用机制,并进行实验验证.方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文期刊服务平台、PubMed、Web of Science,结合TCMSP数据库,筛选三叶青的活性成分及靶点.检索OncoDB.HCC、GeneCards、OMIM、DrugBank数据库,收集HCC相关靶点.利用Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点-疾病网络,STRING数据库进行蛋白相互作用(PPI)分析,Metascape数据库进行GO及KEGG通路富集分析,AutoDock对关键靶点及主要活性成分进行分子对接.通过MTT比色法和细胞形态观察检测人肝癌HepG2细胞增殖,细胞划痕实验和Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭,Annexin Ⅴ/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测相关蛋白表达.结果网络药理学分析得到三叶青活性成分16个、作用靶点228个,其中与HCC相关靶点157个,JUN、AKT1、MAPK1、TP53等靶点可能是三叶青治疗HCC的核心靶点,与HCC密切相关的富集通路为IL-17信号通路、TNF信号通路、P53信号通路、PI3K-Akt信号通路等.分子对接结果显示,三叶青主要活性成分与核心靶点之间具有良好的结合效果.细胞实验结果显示,三叶青各剂量组可显著抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,下调AP-1、MAPK1表达,上调TP53表达.结论三叶青能抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其治疗HCC的作用机制可能与下调AP-1、MAPK1蛋白表达及上调TP53蛋白表达有关.