半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化
Establishment and optimization of sliver staining differential display of microtubers from Pinellia ternata in vitro
摘要目的:建立半夏试管小块茎DDRT-PCR反应最佳体系,为进一步研究半夏试管小块茎相关基因表达提供技术参考.方法:以半夏试管苗的叶柄、试管小块茎为材料,利用正交试验设计,研究模板.Mg2+,dNTPs,引物和DNA聚合酶等因素,对DDRT-PCR反应体系的影响.结果与结论:20μL的反应体系中含有dNTPs 150 pznol·L-1,Taq酶0.6 U,锚定引物2μmol·L-1,随机引物1μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,2μL10×buffer和2.5鹇的cDNA模板.各因素影响程度依次为raq酶>cDNA模板>dNTPs>Mg2+>引物.
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