摘要通过整合基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)、加权基因共表达网络分析(weighted gene correlation network analysis,WGCNA)与临床独立样本集验证,识别类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)寒湿痹阻证的新型生物标志物.首先收集临床诊断为RA寒湿痹阻证患者、RA非寒湿痹阻证患者与健康志愿者的全血样本,开展转录组测序.以RA非寒湿痹阻证患者与健康志愿者作为对照,筛选RA寒湿痹阻证的差异表达基因集;进而,开展GSEA和WGCNA的整合挖掘,获取关键差异表达基因作为该病证的候选生物标志物.再利用临床独立验证样本(每组≥10 例)对上述病证候选生物标志物的表达水平进行实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)验证,采用受试者工作特征(recei-ver operator characteristics,ROC)曲线等评价其辨证效能.研究结果显示,与健康对照组相比,获得 3 601 个RA寒湿痹阻证相关差异表达基因(包含 106 个上调表达基因和 3 495 个下调表达基因),其最显著富集于"免疫-炎症"调节、激素调节、物质和能量代谢相关通路,其次是细胞功能调控和滑膜血管翳生成相关通路等.并通过GSEA和WGCNA表明,变异系数、作用通路和生物模块代表性均排名前 50%的关键差异基因ATP酶蛋白酶 26S亚基 2(proteasome 26S subunit,ATPase 2,PSMC2)为RA寒湿痹阻证的候选生物标志物.进一步,利用临床独立样本集的验证结果显示,PSMC2 针对RA寒湿痹阻证的辨证效能参数——F1 检测值、特异度、准确度、精确度分别为70.3%、61.9%、64.5%、81.3%,ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.96.综上,该研究应用"GSEA-WGCNA-验证"整合策略,识别出PSMC2 为RA寒湿痹阻证的新型候选生物标志物之一,有助于提高RA核心证候的中医临床诊疗水平和辨证客观化水平.