摘要旨在通过单细胞、转录组学测序和体内外实验,探讨巨噬细胞极化在扶正化瘀片(FZHY)治疗肝纤维化中的作用.从GEO数据库中获取肝纤维化相关芯片、转录组数据集及单细胞测序数据集,筛选差异基因;运用GeneCards、DisGeNET、NC-BI、PharmgKB、TTD和OMIM 6 个数据库获取肝纤维化相关基因;从GeneCards数据库中获取巨噬细胞极化相关基因;将上述 3个基因集取交集,构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,使用Cytoscape软件筛选核心蛋白,并通过单细胞测序对核心蛋白的表达模式进行可视化.使用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)构建的肝纤维化小鼠模型,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色对肝组织病理形态学进行观察;免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1 蛋白的表达;比色法检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST);酶联免疫吸附测定(enzyme-linked im-munosorbent assay,ELISA)检测血清中炎症因子水平;蛋白质印记(Western blot,WB)检测肝组织中α-SMA、TGF-β1、CD86、血小板反应蛋白(thrombospondin,THBS)1 的表达情况.使用LPS刺激RAW264.7 细胞构建M1 巨噬细胞极化模型,通过CCK-8法检测细胞活力,WB检测细胞中CD86、THBS1 的蛋白表达情况和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time fluorescent quan-titative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β的mRNA表达水平.结果显示,共获得 26 个潜在调节肝纤维化巨噬细胞极化相关的基因,并筛选出THBS1、LUM、FBLN5 等 10 个肝纤维化巨噬细胞极化相关的核心蛋白.单细胞数据分析,显示排名最靠前的THBS1 可能由M1 巨噬细胞表达.动物实验表明,FZHY可以减少CCl4 诱导的小鼠肝脏中的炎性细胞浸润以及胶原沉积;缓解肝损伤和炎症水平,抑制α-SMA、TGF-β1、CD86 和THBS1 蛋白的表达.细胞实验结果显示,FZHY能显著减少细胞内CD86 和THBS1 蛋白表达以及TNF-α、IL-1β的mRNA水平.结果表明,扶正化瘀片改善肝纤维化的机制,可能与抑制THBS1 蛋白的表达,减少巨噬细胞M1 极化,降低炎症反应有关.