基于PARG/PARP1/NF-κB通路探究半夏泻心汤抑制结肠癌细胞恶性表型的机制
Banxia Xiexin Decoction suppresses malignant phenotypes of colon cancer cells via PARG/PARP1/NF-κB signaling pathway
摘要探讨半夏泻心汤(Banxia Xiexin Decoction,BXD)对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及作用机制.首先基于UPLC-MS/MS对半夏泻心汤入血成分进行鉴定,并利用HPLC技术进行含量检测,然后分别用不同浓度的BXD干预NCM460正常肠上皮细胞及HT29和HCT116结肠癌细胞,通过细胞增殖与活性检测-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测BXD对细胞活力的影响;通过流式细胞术检测BXD对细胞凋亡的影响,并采用Western blot法检测BXD对B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)表达的影响;通过细胞划痕实验检测BXD对细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭法检测BXD对细胞侵袭的影响,并通过Western blot法检测BXD对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白如上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达的影响;采用 Western blot 及 RT-qPCR 技术检测 BXD 对聚(ADP-核糖)糖水解酶[poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]/聚(ADP-核糖)聚合酶 1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]/核因子-κB p65(nuclear factor kappa-B p65,NF-κB p65)信号通路蛋白及相关mRNA表达水平的影响.结果表明,BXD干预后,HT29和HCT116结肠癌细胞增殖能力减弱,BXD可促进结肠癌细胞凋亡,促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达;同时,BXD可以抑制细胞迁移和侵袭,使E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin和vimentin蛋白表达降低;此外,BXD能抑制PARG、PARP1、NF-κB p65蛋白及其mRNA表达.综上,BXD可能通过介导PARG/PARP1/NF-κB信号通路从而抑制结肠癌细胞恶性表型.
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