换一批一种植物多基因表达体系的构建及功能验证
Construction of a multigene expression system for plants and verification of its function
摘要在植物基因工程领域,构建高效、操作方法简便的多基因表达体系是目前植物基因工程的重要环节.该研究设计构建了一个同时携带3个独立基因表达盒和基因沉默抑制子P19蛋白(RNA silencing suppressor 19 kDa protein,P19)表达单元的片段,克隆到常用的植物表达载体pCAMBIA300,获得质粒pC1300-TP2-P19.每个基因表达盒均有不同的启动子、融合标签和终止子.目标基因可以通过酶切连接或重组插入相应位点融合不同的蛋白标签,以便后续的检测.为验证本载体系统的可行性,该研究将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因单独构建到每个表达盒中,烟草瞬时表达和激光共聚焦显微镜的结果表明每个表达盒均能单独正常表达.同时将甜菜苷合成途径的3个关键酶基因BvCYP76AD、BvDODA1、DbDOPA5GT分别构建到3个表达盒中,烟草瞬时表达的表型、蛋白免疫印迹和产物化学检测的结果表明3个外源基因在烟草瞬时表达中高效表达,并生成了目标化合物甜菜苷.以上结果表明,该研究构建的植物多基因共表达系统高效可靠,可实现植物多基因的共转化,为植物天然产物合成途径的解析、功能验证和植物代谢工程提供了可靠的载体平台.
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栏目名称
DOI
10.19540/j.cnki.cjcmm.20250314.102
发布时间
2025-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2020YFA0908000）
中国中医科学院科技创新工程项目（CI2021A04114）
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