单筛过滤法体外分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞及其鉴定
The primary culture and identification of rat brain microvascular endothelial cells isolated in vitro using single sieve filtration method
摘要目的 采用单筛过滤法获取脑微血管以培养纯度高、活性好的原代大鼠脑微血管内皮细胞.方法 取4周龄SD大鼠脑皮质,经剪碎、单层细胞筛网过滤、收集网上截留组织、Ⅱ型胶原酶消化后,置于CO2 培养箱中进行原代培养.通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测鉴定所培养的目的细胞.结果 体外培养24 h后,短梭形细胞从脑微血管段周围爬出;48 h后"岛屿状"的细胞团簇形成;96 h后细胞融合,呈典型的单层、"铺路石样"、镶嵌式贴壁生长.第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测显示细胞胞质呈现棕红色,表达为阳性.结论 单筛过滤法能够成功分离培养出原代大鼠脑微血管内皮细胞.
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