浓缩生长因子促进牙髓干细胞自噬增殖分化与血管生成
Concentrated growth factors promote autophagy,proliferation,differentiation of dental pulp stem cells and angiogenesis
摘要目的 探讨浓缩生长因子(concentrated growth factors,CGF)调控牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)自噬及其对血管生成的影响.方法 配制CGF,观察其形态.ELISA试剂盒检测不同浓度CGF中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)、血小板衍生生长因子BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)水平.分离DPSCs并鉴定其表征.用不同浓度(5%、10%、20%、50%)CGF处理DPSCs,以及20%CGF+自噬抑制剂(3-MA)处理DPSCs.MTT、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、成管实验分别检测细胞增殖、矿化形成和成管能力;RT-qPCR检测细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN),牙本质唾液磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达水平,Western blot检测细胞LC3、beclin1蛋白水平.结果 CGF处理的DPSCs增殖能力提高,10%和20%CGF处理后管形成率增加,20%CGF处理后OPN、DSPP、DMP-1、VEGF基因表达水平及LC3、beclin1蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高.3-MA逆转20%CGF对DPSCs增殖、成骨分化、自噬和血管生成的促进作用.结论 CGF可通过激活自噬,提高DPSCs的增殖、分化能力,促进血管生成.
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