长链非编码RNA BBOX1-AS1通过调节miR-382-5p/PIK3CB促进食管癌细胞增殖迁移及凋亡
Long non-coding RNA BBOX1-AS1 promotes the proliferation,migration and apoptosis of esophageal cancer cells by regulating the miR-382-5p/PIK3CB axis
摘要目的 本研究旨在探究长链非编码RNA γ-丁酰甜菜碱羟化酶1反义RNA 1(γ-butyrobetaine hydroxylase 1 anti-sense RNA 1,BBOX1-AS1)对食管癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制.方法 生物信息学分析BBOX1-AS1 在食管癌组织中的表达、异常表达的miRNAs、lBBOX1-AS1 可能的调控靶点;原位杂交及实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测BBOX1-AS1 及其调控靶基因在食管癌组织和细胞系中的表达;采用EdU染色、Transwell分析和TUNEL染色检测食管癌细胞增殖、迁移及凋亡;Western blot检测食管癌组织相关基因蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因法和Pull down实验联合qRT-PCR与Western blot实验验证BBOX1-AS1对相应靶点的调控作用.结果 BBOX1-AS1在食管癌组织和人食管癌细胞OE-19、TE-1、ECA109、KYSE-150中的表达均明显升高;BBOX1-AS1在食管癌组织中定位在细胞质,在TE-1中呈高表达.磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位β异构体(phosphatidylinositol 4,5-biphosphate 3-kinase catalytic subunit beta isoform,PIK3CB)是hsa-miR-382-5p的作用靶点;BBOX1-AS1上调可促进PIK3CB表达,下调则抑制PIK3CB表达;miR-382-5p模拟物抑制PIK3CB表达,抑制物则促进PIK3CB表达.在TE-1细胞中敲低BBOX1-AS1后,检测miR-382-5p表达,发现miR-382-5p与敲低BBOX1-AS1 呈负相关;miR-382-5p-inhibitor和过表达BBOX1-AS1 可逆转sh-BBOX1-AS1 与si-PIK3CB.抑制细胞增殖、活力、迁移及促进凋亡的效果.结论 ABBOX1-AS1 竞争性结合miR-382-5p上调PIK3CB参与食管癌发生及发展,BBOX1-AS1 可能作为抗食管癌的新靶点.
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