甲基转移酶3对人脑血管平滑肌细胞基因表达及增殖和迁移功能的影响
Effects of Methyltransferase 3 on Gene Expression,Proliferation,and Migration Functions of Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells
摘要目的 探究甲基转移酶3(methyltransferase 3,METTL3)对人脑血管平滑肌细胞(human brain vascular smooth muscle cells,HBVSMC)基因表达以及增殖和迁移功能的影响.方法 采用小干扰RNA(small interfering RNA,shRNA)干扰技术,构建METTL3基因干扰载体并通过腺病毒感染HBVSMC,依据感染情况将其分为空白组(无病毒感染)、对照组(空载病毒感染)和干扰组(METTL3-shRNA病毒感染).使用逆转录实时定量PCR(real-time reverse transcriptional PCR,RT-qPCR)检测各组细胞脑小血管病相关基因锌指蛋白395(zinc finger protein 395,ZNF395)、锌指蛋白548(zinc finger protein 548,ZNF548)、DIS3样外泌体3'-5'核糖核酸外切酶(DIS3-like exosome 3'-5'exonuclease,DIS3L)、白细胞介素增强子结合因子3(interleukin enhancer binding factor 3,ILF3)和G蛋白偶联受体107(G protein-coupled receptor 107,GPR107)的mRNA表达水平,通过RNA甲基化免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)技术检测以上基因mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平,利用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)、Transwell小室实验检测各组HBVSMC的增殖和迁移能力.结果 与空白组相比,对照组细胞各基因的mRNA相对表达水平未发生明显改变.与对照组相比,干扰组细胞ZNF395(P=0.02)、ZNF548(P=0.03)、DIS3L(P=0.02)和GPR107(P<0.01)的mRNA相对表达水平,以及ZNF395(P<0.01)和ZNF548(P<0.01)的m 6 A修饰水平均降低.与对照组相比,干扰组HBVSMC的增殖和迁移能力明显增强.结论 在HBVSMC中干扰METTL3基因表达可能通过下调靶基因ZNF395和ZNF548 mRNA的m6A修饰水平进而增强HBVSMC的增殖和迁移能力.
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