换一批
换一批抗人端粒酶蛋白亚基单域抗体制备和鉴定
Single domain antibody to human telomerase catalytic subunit: preparation and ch aracterization
摘要目的研制抗人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白亚基单域重组抗体.方法以重组His-tag h TERT融合蛋白为抗原免疫小鼠,以逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增小鼠脾细胞重链可变区;经克隆噬菌粒载体pCANTAB 5E及转染大肠杆菌建立噬菌体抗体展示文库, 经过亲和性富集选择阳性克隆,并于大肠杆菌(E.coli.HB2151)中表达为可溶性单域抗体; Western blot确定单域抗体结合特性.结果以RT-PCR扩增His-tag hTERT 免疫小鼠脾细胞RNA,得到35 0 bp小鼠重链可变区DNA片段;通过克隆及转染制备出噬菌体展示抗体文库, 文库大小是 8×104; 经过抗原-抗体亲和性筛选,得到4个克隆,并表达为可溶性单域抗体 (相对分子质量16 000) ;Western Blot分析显示:其中2个克隆的可溶性单域抗体可特异性结合His-tag hTERT融合蛋白(相对分子质量16 700),与His -tag无关;与人癌细胞表达的天然hTERT蛋白(相对分子质量127 000)分析亦显示其特异性结合能力.DNA序列分析证实可溶性单域抗体为小鼠抗体重链可变区VH基因编码.结论利用噬菌体展示技术已初步制备出小鼠重链可变区编码的抗hTERT蛋白的特异单域抗体,为进一步探索其抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用奠定了基础 .
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