转化生长因子-β1诱导下肾小球系膜细胞Smad2的表达与Ⅳ型胶原分泌的相关性研究及来氟米特的干预作用

Study of Correlation Between the Expression of Smad2 and Collagen Type Ⅳ Secretion of Rat Glommerular Mesangial Cell Stimulated by Transforming Growth Factor-β1 and the Effect of Interventions by Leflunomide

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摘要目的探讨转化生长因子(TGF)-β1诱导肾小球系膜细胞(GMC)中Smad2的表达与Ⅳ型胶原(ColⅣ)表达的相关性及来氟米特(LEF)的干预作用.方法建立体外培养大鼠GMC模型,经鉴定后第7代用于实验.按照对大鼠GMC模型处理方式将其分为:TGF-β1组(培养液+TGF-β1 5 ng/mL),LEF-1组(培养液+LEF 5 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL),LEF-2组(培养液+LEF 50 μg/mL+ TGF-β1 5 ng/mL)与对照组(仅加入培养液).分别于15 min,30 min,1h,2h和6h收集标本,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定细胞培养上清液ColⅣ表达.采用间接免疫荧光法检测各组磷酸化(P)-Smad2蛋白表达；采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2 mRNA表达.结果在各时点,①ColⅣ表达量比较:TGF-β1组显著高于对照组(P＜0.05),LEF-1与LEF-2组均显著低于TGF-β1组(P＜0.05).②P-Smad2表达量比较:在对照组仅少量表达,TGF-β1组表达明显升高,与对照组比较,差异有显著意义(P＜0.05); LEF-1与LEF-2组的P-Smad2表达较TGF-β1组显著下降,差异有显著意义(P＜0.05).③Smad2 mRNA表达量比较:在TGF-β1组表达显著高于对照组(P＜0.05),而在LEF-1组与LEF-2组显著低于TGF-β1组(P＜0.01)；但LEF-1组与LEF-2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).④GMC上清液中,ColⅣ与Smad2 mRNA表达量呈正相关(r=0.707,P＜0.05).结论经TGF-β1刺激后,体外培养大鼠GMC中P-Smad2表达及ColⅣ表达量均增加,因此LEF可降低Smad2表达与ColⅣ表达水平,减轻细胞外基质(ECM)沉积.本研究结果为LEF的肾保护作用提供了实验依据.

作者胡雯辉 ^[1] 于力 ^[1] 温跃强 ^[1] 张瑶 ^[1] 郝志宏 ^[1] 陈蓉燕 ^[1] 学术成果认领

作者单位广州医学院附属广州市第一人民医院儿科,广州,510180 ^[1]

关键词系膜细胞转化生长因子-β1 Smad2 Ⅳ型胶原来氟米特 glommerular mesangial cell transforming growth factor-β1 Smad2 collagen Ⅳ leflunomide

主题词转化生长因子(Transforming Growth Factors)胶原(Collagen)肾小球系膜细胞(Mesangial Cells)性(Sex)研究(Research)

栏目名称论著

DOI 10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2013.04.003

发布时间 2013-10-24

基金项目

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