Wnt 信号通路 GSK-3β和β-catenin mRNA在胎鼠围生期脑缺血再灌注损伤中的变化
Expression level changes of GSK-3β and β-catenin mRNA of Wnt signaling pathway in embryo brain after intrauterine hypoxia-ischemia brain damage and reperfusion
摘要目的:探讨围生期脑缺血再灌注损伤后,不同发育期胎鼠胚脑 Wnt 信号通路关键分子糖原合成酶激酶(GSK)-3β及β-连环蛋白(catenin)mRNA 表达水平变化。方法采用完全随机设计,将40只成功受孕的雌性 SD 大鼠分为实验组及对照组,每组各20只。两组分别于孕14,16,18及20 d(分别计为E14,16,18及20)时,各取5只孕鼠予相关处理:实验组钳夹双侧子宫动脉30 min,建立围生期脑缺血再灌注模型,并于再灌注24 h 后留取胎鼠胚脑标本;对照组则不钳夹子宫动脉,仅在与实验组对应时间点留取胎鼠胚脑标本。采用实时定量(RT)-PCR 检测胎鼠胚脑 Wnt 信号通路关键分子 GSK-3β和β-catenin mRNA 表达水平;采用尼氏染色和 TUNEL 标记法,检测两组胎鼠胚脑神经细胞凋亡情况。统计学比较两组胎鼠在相同发育期及同组胎鼠在不同发育期胚脑 GSK-3β及β-catenin mRNA 相对表达量,以及胚脑神经细胞凋亡率差异。结果①两组胎鼠在相同发育期(E14,16,18或20)胚脑 GSK-3β及β-catenin mRNA相对表达量比较,以及同组胎鼠胚脑 GSK-3β或β-catenin mRNA 相对表达量在不同发育期(E14,16,18及20)比较,差异均无统计学意义(P >0.05)。②实验组胎鼠胚脑神经细胞凋亡率,在相同发育期均较对照组高,且差异有统计学意义[(0.254±0.001)vs (0.027±0.004),t =46.547;(0.256±0.022)vs (0.029±0.003),t=45.917;(0.263±0.011)vs (0.029±0.002),t =34.355;(0.265±0.031)vs (0.030±0.003), t=91.108;均为 P <0.001]。不同发育期(E14,16,18及20)同组胎鼠胚脑神经细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P >0.05)。③胎鼠胚脑尼氏染色结果显示,实验组神经细胞的细胞质嗜碱性增强,细胞核固缩浓染。结论Wnt 信号通路和发育期宫内缺血缺氧性脑损伤的关系尚待进一步研究。
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