抗组织相容性复合物Ⅱ类分子转录激活因子核糖核酸酶P的切割活性

The biological activity of MHC classⅡ transactivator ribonuclease P: a novel approach for hepatic transplantation rejection

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摘要目的研究抗组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)核糖核酸酶P(RNaseP)抑制肝细胞表面MHCⅡ分子的表达. 方法 M1-RNA是RNaseP的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第629位点的M1-RNA(M1-629-GS)及其对应的CⅡTA靶序列,分别插入腺相关病毒载体psNAV(psNAV-M1-629-GS)及pGEM-7zf(+)载体(pGEM-629),进行体外转录和切割反应鉴定其活性.通过纳米载体介导psNAV-M1-629-GS稳定转染人胎肝细胞,流式细胞术检测MHCⅡ类抗原表达,逆转录聚合酶链反应检测CⅡTA mRNA水平. 结果 M1-629-GS与pGEM-3176体外切割产物电泳见预期切割条带(553nt和176nt).psNAV-M1-629-GS+肝细胞表面人白细胞抗原(HLA)-DR、DP、DQ的诱导型表达分别为(1.01±0.51)%、(4.37±1.28)%、(1.98±0.42)%,对照组psNAV-M1-452-GS+分别为(10.81±3.09)%、(40.12±2.60)%、(5.71±0.11) %,两组比较分别下调90.65%、89.11%及65.32%;psNAV-M1-629-GS+克隆诱导型CⅡTA mRNA与β-actin比值为0.94±0.25,空载体组比值为2.30±0.49,M1-629-GS可明显下调CⅡTA mRNA含量(t＝5.56,P<0.01). 结论抗CⅡTA RNaseP-M1-629-GS可发展为新一代抗肝移植排斥的核酸药物.