血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞基因表达的影响

The effects of angiotensin Ⅱ on gene expression of hepatic stellate cells

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摘要目的观察血管紧张素Ⅱ对培养肝星状细胞(HSC)株LX2细胞基因表达的影响.方法以1×105 mol/L的血管紧张素Ⅱ与LX2细胞孵育48 h,对照组不加血管紧张素Ⅱ.收集实验组和对照组细胞,分别提取mRNA及总蛋白质,进行抑制性消减杂交和蛋白质双向电泳及质谱分析.结果抑制性消减杂交产物经两轮聚合酶链反应(PCR)扩增,结果显示为200～1 000 bp大小不等的插入片段,挑选36个克隆测序,应用生物信息学技术分析,发现13个克隆与未知基因序列高度同源,其中GenBank号为BC097361、BC057380的基因为具有开放读码框架的完整基因.其余23个克隆均与已知基因的部分序列高度同源(98%～100%),主要相关基因包括β肌动蛋白、亮氨酰tRNA合成酶、基础免疫球蛋白2、丙酮酸激酶、过氧化物酶1、人类白细胞抗原-B关联转录物3等.在血管紧张素Ⅱ孵育的和阴性对照HSC的双向电泳图谱中分别探测到1 110、1 008个点,两个图谱有504个点匹配.其中108个点和对照相比明显上调(容积比＞1.5),153个点和对照相比明显下调(容积比＜0.67),选取其中相对容积上调的10对点进行质谱分析,其中8个点在数据库中检索得到相应结果,分别为抑素、电子转移黄素蛋白亚单位、超氧化物歧化酶2、三磷酸核苷酶等.结论血管紧张素Ⅱ处理后的HSC mRNA表达上调具有增殖加速、凋亡抑制和促进分化等生物学作用,部分上调蛋白质为细胞内信号传导蛋白质、代谢调控蛋白质、细胞凋亡抑制蛋白质以及纤维化相关调控蛋白质.