兔牙髓干细胞与Pluronic F-127嵌段共聚物的体外相容性
Biocompatibility of dental pulp progenitor cells and Pluronic F-127 hydrogel
摘要目的:探讨牙髓干细胞(DPSC)与Pluronic F?127水凝胶生物相容性。方法酶解组织块法获得DPSC,镜下观察细胞形态。制备20%、25%、30%(w/v)的Pluronic F?127水凝胶,扫描电镜(SEM)观察水凝胶支架空间形态,检测支架材料的溶胀率,凝胶化时间。用不同浓度Pluronic F?127水凝胶包封DPSC进行三维培养,并以普通培养皿的二维培养作为对照,镜下观察细胞生长情况。培养第1、3、5、7天通过噻唑蓝(MTT)法检测支架对DPSC增殖的影响。将最佳浓度的Pluronic F?127用于包封DPSC,常规矿化液诱导14 d进行茜素红、甲苯胺蓝染色、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨相关骨桥蛋白(OPN)、Ⅱ型胶原,以评价Pluronic F?127对DPSC成骨及成软骨分化的影响。数据分析采用单因素方差分析。结果成功分离并纯化DPSC,细胞在支架内生长良好;MTT结果显示:第1天各组间差异无统计学意义;第3天,20%Pluronic F?127组细胞增殖A标准值(0.774±0.095)显著高于其他培养组(A对照=0.353±0.096、A25%PF=0.559±0.053、A30%PF=0.532±0.093),差异有统计学意义(F=15.993,P=0.000);第5天时,20%Pluronic F?127组细胞增殖A标准值(0.554±0.510)显著高于其他培养组(A对照=0.260±0.097、A25%PF=0.353±0.049、A30%PF=0.212±0.049),差异有统计学意义(F=20.821,P=0.000)。成骨及成软骨诱导后茜素红及甲苯胺蓝染色呈阳性,对照组呈阴性。实时荧光定量PCR显示,三维诱导组mRNA相对表达水平显著高于其他培养组,差异有统计学意义(FOPN=65.576,POPN=0.000;FCOL?2=38.382,PCOL?2=0.000)。结论20%Pluronic F?127适合DPSC的培养,并可支持其生长及分化。Pluronic F?127可作为DPSC的生物载体,有望成为理想的组织工程支架材料。
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