换一批大鼠骨髓间充质干细胞成牙本质向分化中Wnt信号通路磷酸化抗体芯片分析
Analysis on Wnt signaling phospho antibody array in the process of rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiated into odontoblast-like cells
摘要目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成牙本质向分化过程中,Wnt信号通路主要信号分子的磷酸化变化,初步探讨其作用机制.方法 全骨髓贴壁法培养大鼠BMSC,利用新生大鼠牙胚制备牙胚细胞条件培养基,诱导大鼠BMSC向成牙本质向分化,应用Wnt信号通路磷酸化抗体芯片技术检测诱导组与对照组Wnt信号通路蛋白磷酸化水平并筛选出调变磷酸化位点,应用蛋白印迹法(Western blot)验证芯片结果 .采用SPSS 20.0软件进行统计分析,采用独立样本t检验和校正t检验分析组间差异.结果全骨髓贴壁法获得自我更新和多向分化潜能的BMSC,经牙胚细胞条件培养基诱导2d后,细胞形态开始转变为梭形,7d后形成长梭形并螺旋状排布生长,成牙本质相关蛋白DSPP(t=3.700,P=0.021)、DMP1(t=3.237,P=0.032)、RUNX2(t=12.09,P<0.000)、ALP(t=62.83,P<0.001)表达水平上调,成功诱导BMSC向成牙本质向分化,Wnt信号通路磷酸化抗体芯片检测发现27个磷酸化调变位点,Western blot检测结果显示核内β-catenin表达上调(t=4.588,P=0.044),PKCδ磷酸化水平上调(t=5.438,P=0.032)、AKT磷酸化水平下调(t=30.85,P=0.001),与芯片结果一致.结论 通过Wnt信号通路磷酸化抗体芯片分析,获得BMSC成牙本质向分化过程中,Wnt信号通路磷酸化位点变化.
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关键词
骨髓间充质干细胞成牙本质细胞细胞分化Wnt信号通路磷酸化抗体芯片Bone marrowMesenchymal stem cellsOdontoblastCell differentiationWnt signaling phospho antibody array
栏目名称
DOI
10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2017.02.001
发布时间
2018-02-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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