换一批
换一批结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析
Screening and affinity analysis of aptamers to ESAT-6 protein from Mycobacterium tuberculosis
摘要目的 通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础.方法 体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,SELEX技术筛选获得ESAT-6的适体库,将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力,找出高亲和性适体.结果 经过13轮筛选,ssDNA文库与ESAT-6亲和力从0.257提高到1.163,且12轮后A值趋于平衡,克隆、测序获得ESAT-6的高亲和性适体,其中适体A10亲和力最高,达到1.515,且与CFP10-ESAT6融合蛋白无交叉反应.二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与ESAT-6结合的结构基础.结论 成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了ESAT-6的高亲和性适体.
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分类号
R3
栏目名称
实验研究
DOI
10.3969/j.issn.1674-0785.2007.05.012
发布时间
2008-08-19
基金项目
上海市自然科学基金
上海市科委重点专项
同济大学校科研和教改项目
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