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结核分枝杆菌Rv3872基因的克隆、表达和纯化

Cloning,expression and purification of Rv3872 of Mycobacterium tuberculosis

摘要目的 原核表达并纯化结核分枝杆菌Rv3872蛋白.方法 聚合酶链反应(PCR)技术从结核分枝杆菌标准株H37Rv全基因组中扩增出的表达Rv3872基因序列,将其克隆到pMD18-T载体后,测序分析.亚克隆该目的 基因到pET28a表达载体,最终转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后大量表达重组Rv3872蛋白,再经纯化、定量后,通过Western blot分析其抗原性.结果 扩增Rv3872基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致,表达蛋白经SDS-PAGE分析,在约15 000 kD处有表达条带,纯化后的重组蛋白占总蛋白的90%以上.免疫印迹分析显示重组的Rv3872蛋白具有抗原性.结论 成功表达结核分枝杆菌的Rv3872蛋白,为结核病血清学诊断候选抗原筛选和开发应用打下基础.

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