换一批重组人血管内皮生长因子165腺病毒载体的构建与鉴定
Construction and identification of recombinant bnman vascular endothelial growth factor 165 gene adenoviral vector
摘要目的 探讨构建携带人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的重组腺病毒载体,为进一步的基因转染构建组织工程骨的血管化提供实验基础.方法 采用RT-PCR扩增的方法获得人源性的hVEGF165,并克隆入穿梭质粒pAdTraek CMV.构建的质粒pAdTrack CMV-VEGF165经酶切及测序鉴定正确后,通过pAdeasy 1质粒的介导与腺病毒包装质粒pAdTrack CMV.VEGF165共转染至人胚肾细胞HEK293,经同源重组后获得携带人VEGF的重组腺病毒pAdTrack CMV.VEGF165.应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,测定病毒滴度.结果 PCR鉴定证实重组腺病毒含有人VEGF,病毒滴度为0.5×10"pfu/ml.结论 成功构建的携带人VEGF的重组腺病毒载体能在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度,为基因治疗构建组织工程骨血管化的研究奠定基础.
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主题词
人(Persons)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)转染(Transfection)组织工程(Tissue Engineering)病毒(Viruses)
栏目名称
DOI
10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2012.02.014
发布时间
2012-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江西省教育厅科学技术资助项目（GJJ09327）
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