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海分枝杆菌菌壁蛋白组特性及对Wistar大鼠致病免疫学特征研究

Study on the character of mycobacterium marinum protein and immunology to wistar rats

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摘要目的：探讨海分枝杆菌菌壁蛋白组特性及对Wistar大鼠致病免疫学特征，提高对海分枝杆菌致病机制的认识。方法（1）将临床分离的海分枝杆菌经过培养7～10 d后，挑取培养的菌落，加入到0.9%氯化钠液体中，离心、PBS 冲洗、超声破碎制备菌壁蛋白。将制备好的样品蛋白进行双向电泳，凝胶图像分析。（2）应用McFarland比浊法，制备菌液，估计所配制的细菌剂量浓度。选取雄性Wistar大鼠45只，数字随机法分成3组：实验组A和B、对照组，每组15只。取菌液0.1 ml（浓度：3×108 cfu/ml）经尾静脉注射感染A组，腹腔注射感染B组，对照组经尾静脉注射0.9%氯化钠0.1 ml液体。感染第4周后抽取尾静脉血液1 ml，采用ELISA法分别检测3组大鼠血清中sIL-2R、TNF-α和IFN-γ表达。结果（1）海分枝杆菌菌壁蛋白分子质量处于10～100 kD，PI值主要分布于4.5～6.0之间，在pH 4.5～5.5之间蛋白点分布比较密集，主要集中在偏酸性侧。（2）实验组A和B大鼠血清中sIL-2R、TNF-α和IFN-γ表达无统计学差异（实验组A和B之间，t =1.39～1.91, P=0.065～0.174），分别与对照组比较均有统计学差异（A组与对照组比较， t=5.98～24.08，P<0.05；B 组与对照组比较，t=3.79～27.62，P<0.05）。结论海分枝杆菌菌壁致病性蛋白在10～100 kD之间，Wistar大鼠全身感染4周后可引起白细胞介素表达增强。