siRNA靶向干扰GPC3基因慢病毒载体的构建及其对肝癌Huh-7细胞凋亡的影响

Establishment of stable interference siRNA targeting GPC3 gene and its effects on the apoptosis of hepatocellular carcinoma cell line Huh-7

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摘要目的：构建GPC3基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体，观察GPC3基因对人肝癌细胞系Huh-7凋亡的影响，探讨GPC3基因影响肝癌细胞生长的机制，为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法采用RNA干扰技术转染肝癌细胞系Huh-7，荧光定量 PCR检测GPC3基因在多种肝癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向GPC3基因的小干扰RNA序列PGC-shRNA-GPC3，以脂质体（lipofectamineTM2000）为载体转染人肝癌细胞系，筛选并建立稳定表达 siRNA的细胞株。采用RT-PCR及Western blot检测GPC3 siRNA转染后mRNA表达情况，验证siRNA的干扰效率。流式细胞仪检测阴性对照组、未转染组和转染组细胞凋亡的情况。结果在肝癌细胞株Huh-7中， GPC3基因显示高表达。测序验证 PGC-shRNA-GPC3重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入肝癌细胞株Huh-7后能明显抑制GPC3 mRNA表达水平；同时，流式细胞仪检测发现，GPC3表达下调后，诱导Huh7细胞的凋亡。结论靶向GPC3的siRNA能有效抑制GPC3的表达，并能促进肝癌Huh7细胞凋亡。