Survivin启动子控制自杀基因HSV-TK真核表达载体对肝癌细胞杀伤活性的研究

Anti-hepatoma effect of suicide gene therapy using HSV/TK combined with ganciclovir in hepatoma cells

二维码有效期 120s

摘要目的：研究自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）对人肝癌细胞的特异性杀伤作用，推进该自杀基因治疗原发性肝癌的可行性，从而为肝癌靶向基因治疗奠定一定的基础。方法将pcDNA3.1-pSurvivin-TK质粒转染人肝癌细胞HepG2中，RT-PCR法检测自杀基因mRNA水平，Western blot法检测自杀基因蛋白量的表达；再次转染上述质粒到肝癌细胞HepG2中，随着更昔洛韦（GCV）剂量的增加，来监测 pcDNA3.1-pSurvivin-TK 重组载体对细胞的杀伤效果，CCK-8法检测 GCV 对肝癌细胞的毒性作用，流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果通过 RT-PCR 法、Western blot法表明了转染该重组质粒的HepG2细胞可以成功表达TK基因；此外，在外源药物GCV作用下也实现了对肝癌细胞的特异杀伤，CCK-8法表明，随着药物浓度的增高质粒转染组细胞存活率逐渐下降；流式细胞术检测得知，细胞经GCV处理48 h后，转染pcDNA3.1-pSurvivin-TK重组质粒的肝癌细胞组凋亡率约为（37.37±4.02）%，而未转染质粒组细胞凋亡率约为（1.00±0.62）%，两组间比较有统计学差异（P＜0.01）。结论 HSV-TK/GCV自杀基因的毒性作用随着GCV浓度的增高而上升，并且HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞具有特异性靶向杀伤作用。