换一批增强型绿色荧光蛋白示踪人膀胱癌细胞裸鼠膀胱腔内种植转移的观察
Observing human bladder cancer cell implantation metastasis in urinary bladder of athymic mouse by green fluorescent protein expression
摘要目的 建立能够准确评估成瘤、可视的膀胱癌腔内种植转移动物模型.方法 利用前期获得的具有高侵袭力和稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的单克隆细胞株,培养后通过膀胱插管的方法灌注裸小鼠膀胱(共20只裸鼠).饲养后于2h、24 h、7d、2周、3周和4周时(每个时间点随机取2只裸小鼠),通过体视荧光镜观察成瘤情况.体视荧光镜检测完毕后处死裸鼠,无菌条件下取出膀胱,PBS冲洗,并剪碎,胰蛋白酶重悬,摇床上37℃振荡过夜,流式细胞仪检测EGFP表达量.结果 灌注膀胱肿瘤细胞2h和24 h后的整体荧光成像系统图像,未见肿瘤生成,7d开始有肿瘤逐渐出现,并逐渐增大,到4周时整体荧光成像系统下肿瘤占据膀胱的大部分,并且发出很强的荧光.流式细胞仪检测发现灌注膀胱肿瘤细胞2h、24 h后,可检测到的RGFP表达量较少,并且有下降趋势;1周之后开始逐渐增加,到4周时达EGFP的细胞比例为62.3％和58.4％.结论 该模型具有成瘤率高,可以在不处死裸鼠的情况下体外、动态观察肿瘤的生长;通过流式细胞仪可以对成瘤情况进行精确评估.其可为膀胱癌腔内种植转移机制的研究提供条件,也为评价和筛选抗膀胱肿瘤药物提供了较为理想的动物模型.
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关键词
膀胱肿瘤模型,动物绿色荧光蛋白质类种植转移Urinary bladder neoplasmsModels,animalGreen fluorescent proteinsImplantation metastasis
栏目名称
DOI
10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2016.03.017
发布时间
2016-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81460385）
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